本系统适合于HEK-293细胞及其它293细胞的高密度悬浮造就、DNA瞬时转染及蛋白表白。。

本尝试步骤凭据HEK-293细胞的锥形瓶悬浮造就经验总结而成，也合用于其它悬浮造就方式的293细胞的DNA转染及蛋白表白。。

转染细胞的筹备

1、转染前需确定细胞密度及存活率。。为确保转染成效，建议使用成利益于指数期（密度约为2~4×10^6个/毫升）、存活率大于98% 的细胞；；；

2、转染前细胞无需离心。。若细胞密度为2.0×10^6个/ml时，则可直接转染，若细胞密度>2.0×10^6个/ml，则需兑入新鲜的KOP293造就液，将细胞密度稀释成2×10^6个/毫升。？？？突б部善揪葑陨砭槊索相宜的转染密度；；；

3、细胞筹备好后恒温震荡造就10min后起头转染（5%CO2，37℃、120rpm）。。

瞬时转染（以转染100ml细胞悬液为例）

1、筹备两支15ml无菌离心管，在其中一支中参与5ml KPM和100μg无菌质粒DNA，轻轻奏乐混匀。。取另一支离心管，参与5ml KPM和500μl TA-293转染试剂，轻轻奏乐混匀；；；

2、将含有转染试剂的离心管中所有液体转移至含质粒的离心管中，轻轻奏乐混匀；；；

3、将质粒-载体复合物室温下静置孵育10分钟；；；

4、从恒温摇床中取出细胞，边摇边参与制备好的质粒-载体复合物，放回CO2恒温摇床中震荡造就。。3小时后可凭据必要参与适量抗生素。。

产品表白与检测

1、转染24小时后参与600 μl 293细胞蛋白表白加强剂（KE-293），以增长产品表白量；；； 

2、可选择在转染24小时后增长一次瞬时转染营养增长剂(KT-Feed 50×)，适当提高产品的表白量；；； 

3、凭据产品个性，在转染后第2至6天测定产品表白量；；； 

4、无数重组蛋白的表白量在转染后第6天左右可达到最高值，客户可凭据细胞状态及表白量选择合适的收成功夫。。

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