1. 经过ELISA检测与细胞单克隆，，所筛选的杂交瘤细胞扩增至含5%FBS血清KTM2或其它造就液的T75方瓶中静置造就，，每天观察细胞活率及密度；；

  2. 细胞经过一周三次换液的静置造就，，细胞聚合度达到80%以上时，，将方瓶内的造就液置换成含5%FBS的KD-Hybri造就液造就一代，，主张是让细胞提前适应在KD-Hybri造就液里扩增；；

  3. 随后将方瓶中约90%细胞转移至250ml摇瓶进行逐级降血清悬浮造就（造就体积为摇瓶容积的1/5）！
！２钩浜5%FBS新鲜的KTM2造就液于方瓶中持续造就渣滓约10%细胞，，用于细胞保种；；

  4. 摇瓶逐级降血清的过程通常为5%FBS→2.5%FBS→无血清！
！从5%FBS降至2.5%FBS血清时，，吸走25mL造就液及细胞，，补充25mL不含血清的新鲜KD-Hybri造就液，，使血清浓度降为原来的一半；；

  5. 实现2.5%FBS造就后，，将细胞全数转移至50ml离心管，，1000rpm离心5min，，再用新鲜KD-Hybri造就液重悬细胞，，将细胞稀释至1.0×10^6个/ml，，接种至250ml摇瓶中进行无血清造就；；

  6. 实现驯化无血清造就后，，选择对数成持久（1.5-3.5×10^6个/ml）的细胞进行传代，，以密度为0.5×10^6个/ml接种，，每隔三天传代一次！
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